糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒说明书
一、糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒简介
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus在1946年zui先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该MK体育app竞技 不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质,以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂,它能氧化糖类及有关物质中的1,2-乙二醇基,使之变为二醛,醛与Schiff试剂能结合成一种品红化合物,产生紫红色。由于高碘酸还可氧化细胞内其他物质,使用时应注意选择好高碘酸浓度和氧化时间,使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基,又不至于过氧化,这是很关键的步骤。
本糖原PAS染色试剂盒的特点:采用Leagene*配方技术,大大增强了染色效果;性能稳定,特异性强;操作简捷,仅需1h左右。
二、糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒组成
试剂(A):过碘酸溶液50ml100ml500ml4℃避光
试剂(B):SchiffReagent50ml100ml500ml4℃避光
试剂(C):Lillie-Mayer苏木素MK体育app竞技 50ml100ml500mlRT避光
试剂(D):酸性乙醇分化液50ml100ml500ml
三、糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒主要成分:
试剂(A):主要由过碘酸等组成。
试剂(B):主要由碱性品红、偏重亚硫酸钠等组成。
试剂(C):主要由苏木素、乙醇等组成。
试剂(D):主要由稀酸、乙醇等组成。
自备材料:
1、10%的福尔马林
蒸馏水或去离子水
3、95%乙醇
4、无水乙醇
5、封片剂
四、糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒操作步骤(仅供参考)
1、常规固定,常采用10%的福尔马林,常规脱水包埋。
2、石蜡切片脱蜡入蒸馏水;冰冻切片直接入蒸馏水。
3、自来水冲洗2~3min,再用蒸馏水浸洗2次。
4、置于过碘酸溶液中,室温放置5~8min,一般不宜超过10min.
5、自来水冲洗1次,再用蒸馏水浸洗2次。
6、样本放入SchiffReagent,置于室温阴暗处,浸染10~20min。
7、自来水冲洗10min。
8、样本置于Lillie-Mayer苏木素MK体育app竞技 中,染细胞核1~2min。
9、酸性乙醇分化液分化。
10、自来水冲洗10~15min后,更换双蒸水清洗,使其返蓝。
11、逐级常规乙醇脱水。
12、二甲苯透明。
13、中性树胶封固。
五、糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒染色结果:
PAS反应阳性物质(糖原或多糖)红色或紫红色
细胞核蓝色
细胞质深浅不一的红色
备注:颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和SchiffReagent中作用时间的长短。
阴性对照(可选):
1、对照切片可以用唾液,取唾液片(过滤后用)处理30~60min后,与其他切片共同入过碘酸溶液。
2、对照片可以淀粉酶,取淀粉酶1g于双蒸水或PBS(pH5.3)100ml,处理30~60min后,与其他切片共同入过碘酸溶液。
3、如果对照片采用其自身样本,对照片不经过碘酸溶液这一步,直接入SchiffReagent。染色结果:对照片呈阴性反应,无紫红色颗粒。
六、注意事项:
1、切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。
2、过碘酸氧化时间不宜过久,氧化时的温度以18~22℃zuijia。
3、试剂(A)、(B)应置于4℃密闭保存,使用时避免接触过多的阳光和空气。使用前,
提前30min取出恢复到在室温后,避光暗处使用。
4、酸性乙醇分化液应经常更换新液,其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性乙
醇分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
5、在过碘酸溶液和SchiffSchiffReagent中作用时间非常重要,该依据切片厚薄、组织
的类别等决定。
6、本试剂盒常用于常规组织切片染色,对于真菌、细胞、极其薄的切片,建议采购糖原PAS染色试剂盒(细胞真菌),因为其过碘酸溶液和苏木素溶液浓度更低,不宜过染。7、冷冻切片染色时间尽量要短。
8、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
七、有效期:6个月有效。