远慕详述：PCR-DNA实验注意事项
点击次数：1302 更新时间：2017-01-09
PCR-DNA实验注意事项
1．加样方面（混匀，不要有气泡，管壁上不要有液体）
2．试剂方面（冷冻，不宜反复冻融超过3次；可分装）
3．使用非肝素钠抗凝剂采血管
4．实验室方面（实验做完注意通风、84清理台面、紫外线杀菌）
5．注意污染（平常配试剂管盖的放置不要污染、加样时指甲及手套不要碰到管内壁）
实验操作步骤
1.室温融解；
2.取血清（或标准品）50ul加入50ul核酸提取液先震荡混匀10秒然后6000转瞬间离心一下（等离心机转速到了接近6000按停止）99度水煮或干浴10分钟，稍微弹碎；然后13000转离心10分钟保留上清液备用
3.配混合液
取N*36ul混合液+N*0.4ulTAQ酶混匀（先震荡混匀10秒然后6000转瞬间离心）（N为管数，实际上我们要取N+1因为加样管壁上会沾液不多配会导致zui后一个有误差例如有10个样本则取11*36+11*0.4；）
4.取上述混合液36.5ul分别加入pcr反应管不要有气泡管壁不要有水珠
5.加样取4ul上清液加入pcr管加样枪在液体里面反复打个7~8下zui后在离心机稍微离一下6000转瞬间离心6.上机反应检查管壁水珠气泡
实验结果方面
1.标准曲线相关系数至少为-0.99越小越好
2.根据曲线分析结果（曲线是否稳，无波浪）38循环曲线抬头为阴性
实线抬头曲线不抬头为YMDD变异（实线---病毒量虚线---判断有无变异）
21个循环值大概为7次方后面加3.5个循环减少一个次方即24.5左右为6次方......
友情提示：上述操作不一定全正确，请自行参考各试剂厂试剂说明书以及检验方面相关资料。
