MTT 溶液(5mg/ml)
产品简介：
MTT 比色法是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT 细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。 MTT 检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色 Formazan 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 在特定溶剂 (如 DMSO)存在的情况下，可以被*溶解。然后通过酶标仪可以测定 570nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
产品组成：
名称 规格 | 10ml | Storage |
MTT solution(5mg/ml) | 10ml | -20℃避光 |
产品说明书 | 一份 | |
自备材料：
1、 细胞培养液
2、 胰蛋白酶消化液
3、 低速离心机
4、 96 孔培养板
5、 细胞计数板或计数器
6、 DMSO 或 Formazan solvent
7、 摇床
8、 显微镜
9、 酶联免疫检测仪
操作步骤(仅供参考)：
1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期， 常规胰蛋白酶消化液消化细胞(悬浮细胞无需
消化)。
2、 低速离心，收集细胞沉淀。
3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。
4、 细胞接种于 96 孔培养板，一般接种密度为 3000～10000 /孔。通常细胞增殖实验每孔
加 3000 个细胞，细胞毒性实验每孔加入 6000 个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数
目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。
5、 37℃ 5%CO2 继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养 6～24h。
6、 按照实验具体要求，给予 0～20ml 干预药物处理，37℃ 5%CO2 继续培养至合适时间。
7、 弃培养液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鲜培养液，在细胞培养箱内继续
孵育 4h。
8、 弃培养液，每孔加入 110ml DMSO，置摇床上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解 。
8、 弃培养液，每孔加入 110ml DMSO，置摇床上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解 。
如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时
间会长一些。
9、 在酶联免疫检测仪 570nm 测定 各孔吸光度。
注意事项：
1、 MTT solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数，以免失效 ，当颜色变为灰绿色时，
请勿使用。
2、 由于使用 96 孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。
3、 MTT solution 在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或 20～25℃水浴至全部融解
后使用。
4、 观察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光学显微镜观察。
5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。
6、 应注意设立 OD 调零孔和对照。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 个月有效。
