elisa检测中显色常见问题的解决
点击次数：2127 更新时间：2014-07-24
elisa检测中显色常见问题的解决
所有检测孔均无色
原因可能为酶结合物或底物失效、底物漏加（错加）、阳性对照漏加或错加，其中以酶结合物失效和底物错加为常见。查找原因的方法是将酶结合物与底物直接混合，观察有无显色；如显色则提示为阳性对照漏加或底物错加所致；若不显色，用新酶结合物与底物混合，观察有无显色；不显色则提示底物失效，显色提示原用酶结合物失效。在确定底物错加或失效者，若来加终止液。可重新洗板再显色。
所有检测孔均显色
原因多为洗板不净（扎内残留未结合的酶结合物）或显色时间过长。洗板是elisa检测重要环节．应严格按说明书进行，可以适当延长浸泡时间、增加洗涤次数ｌ～２次，否则极易导致假阳性（竞争抑制法为假阴性）结果。
质控孔无色
一般为酶结合物活性降低所致（排除底物错加、失效及漏加质控物）。质控物一般为临界值的，是确定试验成功与否的重要依据。阳性对照虽然显色，但可以发现其吸光度变化较大，该批试验须重作，防止弱阳性结果的漏检。
底物有颜色
目前国产elisa试剂盒的色原底物常为Ａ、B两种液体，分别为一定浓度的双氧水和四甲基联苯胺（TMB）或邻苯二胺（OPD）溶液，他们都不稳定，使用保存不当易产生颜色；在使用时发现有颜色（或各取一滴混合后显色），说明他们变质或已受污染，必须丢弃。
试剂盒的贮藏应按说明书的要求，在elisa检测中应严格按照elisa的操作规则执行，避免elisa检测中的常见实验问题。
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